Diagnóstico molecular de infecção malárica e maldeias indígenas ianomâmis

Nos últimos anos, a incidência de malária no Brasil vem reduzido significativamente, particularmente, em virtude das medidas de controle. Neste novo cenário, faz-se necessário identificar e tratar a malária submicroscópica, uma vez que estes indivíduos constituem fonte de infecção para o mosquito vetor. Neste contexto, nosso grupo de pesquisa vem aprimorando o diagnóstico molecular de malária e, recentemente, padronizou uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR), altamente sensível, para a detecção dealvos não ribossomais (Pvr47 e Pfr364) dos plasmódios. Baseado nestes achados, o objetivo do presente trabalho foi investigar a malária subpatente em tribos indígenas de povos Ianomâmis, onde as baixas parasitemias parecem ser frequentes. A população de estudo foi constituída de indivíduos pertencentes a cinco aldeias ianomâmis do Polo Base Marari, estado do Amazonas. O estudo envolveu dois cortes transversais, sendo realizados nos meses de setembro (primeiro corte transversal) e novembro (segundo corte transversal)de 2014. Foram incluídos no estudo um total de 914 indígenas, com cerca de 1590 amostras de sangue coletadas em papel de filtro. Para o diagnóstico molecular de malária, quatro diferentes protocolos de PCR foram utilizados, sendo três baseados em alvos ribossomais(18S rRNA) e um em alvos não ribossomais (Pvr47/Pfr364) dos plasmódios.

Os resultados aqui obtidos permitiram demonstrar que os alvos Pvr47/Pfr364 foram os mais sensíveis para o diagnóstico de malária submicroscópica, embora não se mostraram adequados para o diagnóstico de espécie. Dentre os protocolos baseados no gene 18S rRNA aqui utilizados(Nested-PCR, RT-Mangold e RT-Rougemont), a Nested-PCR (método molecular dereferência) se mostrou mais apropriada para o diagnóstico específico das infecções maláricas submicroscópicas. Em conjunto, este estudo de infecção malárica em populações ianomâmis permitiu demonstrar que: (i) enquanto 0,9% das amostras foram positivas pelamicroscopia ótica (MO), diagnóstico de rotina, os protocolos moleculares identificaram 7,8% de postividade; (ii) P. vivax foi a espécie predominante, seguido do P. malariae e P. falciparum em proporções similares; (iii) a positividade por malária diminuiu com a idade(crianças>adolescentes>adultos) e foi influenciada pelas variações sazonais(setembro>novembro); (iv) a prevalência de malária variou significativamente nas diferentes aldeias, sugerindo que a doença não está homogeneamente distribuída na área de estudo. Espera-se que os resultados aqui obtidos possam contribuir para o direcionamento e monitoração de medidas de controle em reservas indígenas, bem como estimar a real incidência de malária nas áreas sob vigilância epidemiológica.

Atividade antimalárica, espectro e mecanismo de ação de compostos de rutênio e platina com a cloroquina / Antimalarial activity, spectrum and mechanism of action of ruthenium and platinum compounds with chloroquine

INTRODUÇÃO: A malária é uma das doenças infecciosas de maior incidência e que mais leva a óbito no mundo. Os medicamentos disponíveis são capazes de combater o parasita no ciclo intraeritrocítico, no entanto há cepas resistentes ao tratamento com quinolinas e temisininas. Além disso, os medicamentos em uso clínico não eliminam as formas sexuadas do parasita, responsáveis pela transmissão, nem os hipnozoítos, fase hepática latente causadora das recidivas da doença. Em virtude disso, é necessário identificar novos fármacos antimaláricos. Dentre as classes de moléculas com potencial terapêutico antimalárico, os complexos com metais de transição se destacam como possíveis candidatos...

Nanotechnology: meeting the future of Veterinary Parasitology Research

The field of nanotechnology involves an array of different areas of expertize with the application of innovative products in Medicine, Engineering, and to a less extent to Veterinary Medicine. In our opinion, more research is needed, in special to Animal Parasitology, to develop state of the art products to solve old problems. Livestock, pets and wildlife may benefit from products in nanoscale, such as vaccines, target recombinant proteins, or new drug candidates. Thus, we want to give some food for thought to drive scientific programs into nanotechnology, creating a safer environment to animals and humans...

Desenvolvimento de uma estratégia automática para busca de potenciais antígenos em proteomas preditos de Plasmodium spp / Developing a strategy to automatically search for potential antigens of Plasmodium spp predicted proteomes

A malária é uma doença que provoca um enorme impacto em todo mundo e muitos esforços tem sido feitos na tentativa de eliminar esta doença há séculos. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra esta doença se tornou prioridade para muitos grupos de pesquisa, entretanto apenas um antígeno apresentou resultados promissores em ensaios clínicos de fase III. O processo de identificação de candidatos promissores para comporem uma vacina é muito laborioso e demanda um tempo muito grande, principalmente devido à biologia complexa destes parasitos intracelulares. Identificar proteínas nesses tipos de patógenos intracelulares é um grande desafio e requer a análise de diferentes fatores ao mesmo tempo. Um bom candidato a antígeno deve possuir características que façam com que a proteína ou pelo menos parte dela, entre em contato com o sistema imune do hospedeiro em algum momento do ciclo de vida do parasito e que este contato seja capaz de gerar uma resposta imune capaz de neutralizar o parasito e acabar com a infecção. As proteínas secretadas/exportadas se encaixam perfeitamente nessas características e foi justamente com o objetivo de identificá-las que foi desenvolvida uma estratégia automática integrando diferentes programas para buscar estas proteínas. Dessa forma, o proteoma predito de 5 espécies diferentes do gênero Plasmodium foi submetidas à análise de três programas que procuram por características importantes para proteínas exportadas/secretadas nesse gênero. O peptídeo sinal foi investigado utilizando o SignalP, um script em Perl foi desenvolvido para buscar um motivo que é crucial para a exportação de algumas proteínas (PEXEL) e os domínios transmembrana foram buscados utilizando o TMHMM. Algumas proteínas selecionadas foram submetidas à predição de epitopos de células B. Com esta abordagem foi possível identificar algumas famílias de proteínas que já são conhecidas como proteínas exportadas, como Rifin e Stevor, o que mostra que esta abordagem pode ser uma ferramenta útil na identificação de novos prováveis alvos para o desenvolvimento de uma vacina eficaz. Utilizando esta metodologia, esperamos contribuir para aumentar o número de proteínas em testes para formulação de um antígeno que seja capaz de ajudar no controle e erradicação desta doença que causa tantos prejuízos para a humanidade.

Desenvolvimento de uma estratégia automática para busca de potenciais antígenos em proteomas preditos de Plasmodium spp

A malária é uma doença que provoca um enorme impacto em todo mundo e muitos esforços tem sido feitos na tentativa de eliminar esta doença há séculos. O desenvolvimento de uma vacina eficaz contra esta doença se tornou prioridade para muitos grupos de pesquisa, entretanto apenas um antígeno apresentou resultados promissores em ensaios clínicos de fase III. O processo de identificação de candidatos promissores para comporem uma vacina é muito laborioso e demanda um tempo muito grande, principalmente devido à biologia complexa destes parasitos intracelulares. Identificar proteínas nesses tipos de patógenos intracelulares é um grande desafio e requer a análise de diferentes fatores ao mesmo tempo. Um bom candidato a antígeno deve possuir características que façam com que a proteína ou pelo menos parte dela, entre em contato com o sistema imune do hospedeiro em algum momento do ciclo de vida do parasito e que este contato seja capaz de gerar uma resposta imune capaz de neutralizar o parasito e acabar com a infecção. As proteínas secretadas/exportadas se encaixam perfeitamente nessas características e foi justamente com o objetivo de identificá-las que foi desenvolvida uma estratégia automática integrando diferentes programas para buscar estas proteínas.

Dessa forma, o proteoma predito de 5 espécies diferentes do gênero Plasmodium foi submetidas à análise de três programas que procuram por características importantes para proteínas exportadas/secretadas nesse gênero. O peptídeo sinal foi investigado utilizando o SignalP, um script em Perl foi desenvolvido para buscar um motivo que é crucial para a exportação de algumas proteínas (PEXEL) e os domínios transmembrana foram buscados utilizando o TMHMM. Algumas proteínas selecionadas foram submetidas à predição de epitopos de células B. Com esta abordagem foi possível identificar algumas famílias de proteínas que já são conhecidas como proteínas exportadas, como Rifin e Stevor, o que mostra que esta abordagem pode ser uma ferramenta útil na identificação de novos prováveis alvos para o desenvolvimento de uma vacina eficaz. Utilizando esta metodologia, esperamos contribuir para aumentar o número de proteínas em testes para formulação de um antígeno que seja capaz de ajudar no controle e erradicação desta doença que causa tantos prejuízos para a humanidade.

Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932: Estudo de contaminação por bacilo entomopatogênico em colônias mantidas em insetários

Os mosquitos da espécie Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932 são vetores da malária humana nas Américas. Desde o ano de 2004, esse vetor tem sido mantido em colônia no Laboratório de Malária do Centro de Pesquisas René Rachou (Lamal), Fiocruz-MG, onde tem sido utilizado para estudos de interação parasito-vetor. Na natureza, as larvas desses insetos desenvolvem-se em água salobra e, no insetário de criação do Lamal utiliza-se água do mar na proporção de 1:10 em água da torneira. No ano de 2008, observou-se uma queda significativa na produção de mosquitos da colônia, devido, principalmente, à mortalidade excessiva de larvas. As larvas, de 3º e 4º estádios, apresentavam características morfológicas semelhantes àquelas relacionadas com contaminação por bacilos entomopatogênicos. Como algumas bactérias do gênero Bacillus são patogênicas às larvas de mosquitos, o objetivo do presente trabalho foi identificar a (as) espécie (es) responsável (is) pela mortalidade das larvas de Anopheles aquasalis, bem como identificar as toxinas envolvidas nessa mortalidade. Através da caracterização morfológica e molecular foi possível identificar o Bacillus sphaericus como contaminante na colônia de criação de Anopheles aquasalis.

Visando uma comparação inter-insetários, analisou-se ainda amostras de três insetários distintos, sendo a presença dos bacilos identificadas em dois desses. Pela técnica de PCR buscou-se amplificar as 5 toxinas mais frequentes das estirpes de B. sphaericus (BinA, BinB, Mtx1, Mtx2 e Mtx3 ), sendo que apenas 3 (família das MTxs) foram detectadas nas amostras estudadas. Os resultados dos ensaios biológicos confirmaram a toxidade destas toxinas para as larvas de 3º e 4º estádios. Os ensaios biológicos realizados identificaram as estirpes isoladas do Laboratório de Malária como de alta toxicidade para o Anopheles aquasalis. Em resumo, este trabalho foi o primeiro a demonstrar a ocorrência de contaminação natural por bacilos entomopatogênico sem colônias de mosquitos mantidas em insetário e a caracterizar as toxinas envolvidas nesta contaminação. Espera-se que estes resultados possam contribuir para traçar estratégias de monitoramento e controle de contaminação em insetários de experimentação

Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932: Estudo de contaminação por bacilo entomopatogênico em colônias mantidas em insetários / Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis Curry 1932: Study of contamination by entomopathogenic bacilli in colonies kept insectaries

Os mosquitos da espécie Anopheles (Nyssorhynchus) aquasalis, Curry 1932 são vetores da malária humana nas Américas. Desde o ano de 2004, esse vetor tem sido mantido em colônia no Laboratório de Malária do Centro de Pesquisas René Rachou (Lamal), Fiocruz-MG, onde tem sido utilizado para estudos de interação parasito-vetor. Na natureza, as larvas desses insetos desenvolvem-se em água salobra e, no insetário de criação do Lamal utiliza-se água do mar na proporção de 1:10 em água da torneira. No ano de 2008, observou-se uma queda significativa na produção de mosquitos da colônia, devido, principalmente, à mortalidade excessiva de larvas. As larvas, de 3º e 4º estádios, apresentavam características morfológicas semelhantes àquelas relacionadas com contaminação por bacilos entomopatogênicos. Como algumas bactérias do gênero Bacillus são patogênicas às larvas de mosquitos, o objetivo do presente trabalho foi identificar a (as) espécie (es) responsável (is) pela mortalidade das larvas de Anopheles aquasalis, bem como identificar as toxinas envolvidas nessa mortalidade. Através da caracterização morfológica e molecular foi possível identificar o Bacillus sphaericus como contaminante na colônia de criação de Anopheles aquasalis. Visando uma comparação inter-insetários, analisou-se ainda amostras de três insetários distintos, sendo a presença dos bacilos identificadas em dois desses. Pela técnica de PCR buscou-se amplificar as 5 toxinas mais frequentes das estirpes de B. sphaericus (BinA, BinB, Mtx1, Mtx2 e Mtx3 ), sendo que apenas 3 (família das MTxs) foram detectadas nas amostras estudadas. Os resultados dos ensaios biológicos confirmaram a toxidade destas toxinas para as larvas de 3º e 4º estádios. Os ensaios biológicos realizados identificaram as estirpes isoladas do Laboratório de Malária como de alta toxicidade para o Anopheles aquasalis. Em resumo, este trabalho foi o primeiro a demonstrar a ocorrência de contaminação natural por bacilos entomopatogênico sem colônias de mosquitos mantidas em insetário e a caracterizar as toxinas envolvidas nesta contaminação. Espera-se que estes resultados possam contribuir para traçar estratégias de monitoramento e controle de contaminação em insetários de experimentação.

Situação epidemiológica da malária no Estado do Tocantins, Brasil, a partir da emancipação política e administrativa, 1989 a 2009 / Epidemiological status of malaria in the State of Tocantins, Brazil, after its political and administrative emancipation, 1989 to 2009

Objetivo: o estudo objetiva descrever os principais indicadores epidemiológicos da malária no Estado do Tocantins, Brasil, e compará-los àqueles da Amazônia legal, entre 1999 e 2009. Métodos: foram utilizados dados secundários do Sistema de Informação de Malária (SISMAL) e do Sistema de Informações de Vigilância Epidemiológica da Malária (SIVEP-Malária), da Secretaria de Vigilância em Saúde do Ministério da Saúde. Resultados: Tocantins registrou 5.679 casos de malária em 1989 e 129 casos em 2009; nesse período de 20 anos, a incidência parasitária anual diminuiu 94 por cento; os casos importados predominaram sobre os autóctones durante toda a série histórica; o indicador de internações por malária permaneceu elevado; Plasmodium vivax foi a principal causa de morbidade. Conclusões: Tocantins se classifica como área de baixo risco para malária e assemelha-se à situação epidemiológica dos estados não Amazônicos; porém, em função dos casos importados, o esforço conjunto das instituições locais deve se manter ativo para detectar os primeiros sinais da doença e evitar o surgimento dos casos isolados.

Objective: the study aims to describe the main epidemiological indicators of malaria in the State of Tocantins, Brazil, and compare it those of Amazon region data, from 1999 to 2009. Methods: descriptive analysis on secondary data of Malaria Surveillance System (SISMAL) and Malaria Epidemiological Surveillance Information System (SIVEP-malaria), Health Surveillance Secretariat, Ministry of Health. Results: Tocantins registered 5,679 cases of malaria in 1989 and 129 cases in 2009; in this period of 20 years, the annual parasite incidence decreased 94 per cent; imported cases prevailed over indigenous ones throughout the historical series; the indicator of hospital admissions for malaria remained high; Plasmodium vivax was the major cause of morbidity. Conclusions: Tocantins is classified as low risk area for malaria, similar to the epidemiological status of Brazilian States not included in the Amazon region; however, because of imported cases, the joint effort of local institutions needs to continue active to detect early signs of the disease and to prevent new isolated cases.

Vitamin B1 and B6 in the malaria parasite: requisite or dispensable?

Vitamins are essential compounds mainly involved in acting as enzyme co-factors or in response to oxidative stress. In the last two years it became apparent that apicomplexan parasites are able to generate B vitamers such as vitamin B1 and B6 de novo. The biosynthesis pathways responsible for vitamin generation are considered as drug targets, since both provide a high degree of selectivity due to their absence in the human host. This report updates the current knowledge about vitamin B1 and B6 biosynthesis in malaria and other apicomplexan parasites. Owing to the urgent need for novel antimalarials, the significance of the biosynthesis and salvage of these vitamins is critically discussed in terms of parasite survival and their exploitation for drug development.

Manifestaciones clínicas y hematológicas de paludismo congénito. Revisión a propósito de un caso / Clinical and hematological manifestations of congenital paludism. Review of a case

El paludismo congénito es un padecimiento poco frecuente y por lo tanto poco sospechado, principalmente en los centros hospitalarios de comunidades con baja endemicidad. Sin embargo, es factible que se pueda diagnosticar cuando el índice de sospecha es alto, o bien en forma casual, cuando el cuadro y la evolución clínica obligan a los médicos tratantes a socilitar valoraciones por otros servicios. Se presenta el caso de un niño originario y residente en el Distrito Federal, que desde las 24 horas de vida presenta cuadro clínico compatible con sepsis neonatal, recibiendo incluso tratamiento para la misma con evolución aparentemente satisfactoria, pero que posteriormente presenta alteraciones hematológicas caracterizadas por anemia, leucopenia y trombocitopenia. Se detectó la presencia de hematozoario en frotis de sangre periférica en dos determinaciones, lo cual se confirma mediante prueba de ELISA. Recibe tratamiento con cloroquina y responde satisfactoriamente, con controles posteriores negativos y disminución de las cifras de anticuerpos. Se corrobora además, presencia del hematozoario en la madre, aparentemente sin factores de riesgo

Incidencia de paludismo en la Maná, Provincia del Cotopaxi 1993-1995

Se realizó un estudio retrospectivo (1993-1995), en el área de la Maná en pacientes don Dg. de paludismo confirmado mediante examen de gota fresa, los resultados indican que el paludismo es una enfermedad endémica que se presenta sobre todo en los meses de febrero, marzo y abril, con predominio en el sexo masculino, durante las dos primeras décadas de la vida; el agente etiológico más frecuente es el plasmodium vivax. La frecuencia anual de casos ha disminuído significativamente de 1993-1995, no encontrándose causa precisa que los justifique...